微卫星不稳定性（MSI）检测发表时间：2024-04-12 16:05 微卫星（Microsatellite, MS）是指人类基因组上的一段串联重复序列（1-6个重复单元），又称短串联重复，通常重复次数为10-60次。其中常见的是单核苷酸和双核苷酸的重复序列，如(A)n和(CA)n。人体在正常状态下，微卫星的长度和排序保持不变，并且稳定遗传。  微卫星不稳定性（Microsatellite Instability，MSI），是指由于在DNA复制时插入或缺失突变引起的微卫星（Microsatellite, MS）序列长度改变的现象，常由错配修复功能（Mismatch repair, MMR）缺陷引起。  根据微卫星状态可分为以下三类：微卫星高度不稳定（MSI-high，MSI-H）、微卫星低度不稳定（MSI-low，MSI-L）和微卫星稳定（microsatellite stability，MSS）。 不同肿瘤出现MSI-H的比例存在较大差异，如下图所示。从中可见，MSI-H发生率较高的实体瘤包括子宫内膜癌（EC）、结直肠癌（CRC）、胃癌等，同时也发生于其它肿瘤。 常见肿瘤细胞中MSI-H比例 目前检测癌细胞中的MSI时，既可以通过检测MMR基因缺失来确定是否发生MSI，如依赖于免疫组化技术的蛋白水平检测，也可以直接检测MSI的序列变化，如PCR（聚合酶链反应）检测等的分子水平检测。 MSI多由MMR蛋白表达缺失导致的dMMR所致，故可通过检测MMR蛋白缺失来反映MSI状态。IHC染色分析MMR蛋白表达是最常用的方法，它主要是检测4个已知MMR蛋白（MLH1、MSH2、MSH6及PMS2），阳性表达定位于细胞核：
IHC操作相对简单、成本较低，便于开展。但有可能漏掉其他MMR蛋白引起的异常，且检测结果易受判读人员主观因素影响，导致出现假阴性和假阳性情况。 目前公认的MSI检测的金标准是PCR毛细管电泳法。通过比较肿瘤患者组织样本与正常癌旁组织样本位点突变情况可判定MSI状态。检测位点一般有以下2种选择：
其中≥2个位点发生改变判定为MSI-H，仅1个位点发生改变判定为MSI-L，无位点改变判定为MSS。 已有大量研究证实，IHC检测结果与PCR检测结果具有高度关联性，灵敏度为92%，特异性可达100%。 PCR法准确性好、标准化程度高，目前NMPA已批准3款产品以满足临床需求（见下表）。但PCR法操作复杂，花费较高，且在结果判断中会碰到一些问题，如荧光过强或过少、非特异性峰、不显著峰大小改变，杂合性缺失等。 近年来，NGS平台目标区域测序（即NGS panel）或全外显子组测序（WES）/全基因组测序（WGS）开始应用于MSI检测，一次性可检测几个至上千个MSI位点、MMR基因状态及其他分子标志物。因此，NGS可提供更多分子相关信息，如TMB、MMR基因胚系突变（林奇综合征确诊）及肿瘤体细胞突变状态等。EMSO精准医学工作组推荐将NGS作为MSI的二线检测方法；NCCN结直肠癌临床实践指南亦指出MSI检测可通过经验证的NGS panel进行，尤其是对于需要同时检测RAS/BRAF突变状态的转移性CRC患者。相比PCR法，NGS具有更高的灵敏度，但其检测成本高、数据复杂故需优良算法和大样本验证，结果解读尚缺乏统一标准。 MSI是MMR蛋白功能缺陷导致的结果，MMR蛋白功能缺陷同时也会导致基因组呈现高突变表型，进而导致肿瘤发生风险增加。MSI检测对于包括CRC和EC在内的多种实体瘤患者的诊断、治疗和预后中均具有重要价值。 目前，有关MSI检测的临床意义有如下观点： // 01 Lynch综合征的筛查 Lynch综合征，亦称遗传非息肉病性结直肠癌（HNPCC），是一种呈家族遗传倾向的常染色体显性遗传病，由于MMR基因发生胚系突变所致，约占所有结直肠癌（Colorectal carcinoma, CRC）3%～5%。Lynch综合征最突出的特点之一是携带者本人或家族成员可发生CRC及其他多种Lynch相关肿瘤。MSI是Lynch综合征的特征性分子，约90%以上表现出MSI。同时并不是所有的MSI均是Lynch综合征，在散发性CRC中也存在10%～15%的MSI。 // 02 捕获面结直肠癌（CRC）患者预后及治疗指导积大 临床研究证实，MSI与结直肠癌的预后有着密切的关系。MSI-H结直肠癌患者相比MSS患者具有显著的生存优势，临床表现较差，但预后更好。研究证实，针对Ⅱ/Ⅲ期结直肠癌患者，MSI-H患者的总生存期及无病生存期明显延长。美国国家综合癌症网络（National Comprehensive Cancer Network，NCCN）发布的结直肠癌指南，建议MSI检测应在所有结直肠癌史的病人中进行。 // 03 指导用药 研究证实，MSI-H的结直肠癌Ⅱ期患者不能在氟尿嘧啶（5-FU）治疗中获益。同时因MSI-H的晚期结直肠癌患者通常具有PD-1及PDL-1等的高表达，可通过对PD-1/PD-L1的靶向抑制，促使机体免疫系统攻击和杀灭肿瘤细胞。目前美国FDA已批准PD-1免疫治疗单抗pembrolizumab、ipilimumab和nivolumab用于具有错配修复缺陷（dMMR）/MSI-H表型的转移性结直肠癌（mCRC）的末线治疗。除了mCRC的治疗外，2017年5月，美国FDA批准了PD-1抗体pembrolizumab用于治疗成人和儿童具有dMMR/MSI-H表型的没有其他治疗选择的，不可切除或转移性实体瘤患者。
MSI是多种实体瘤或相关疾病的重要标志物，已受到越来越多权威指南的重视及推荐，尤其在胃肠肿瘤中已成为必须检测和常规检测项目，在肿瘤筛查、化疗、免疫治疗及预后评估等方面具有举足轻重的地位。 实验室应优先选择有证的MSI试剂用于临床检测，并做好质量保证工作，以得到准确可靠的MMR/MSI检测结果，使更多肿瘤患者获益。 ▶注：图文仅供读者学习、借鉴与欣赏，不作为投资建议，不得用于商业用途，如涉及作品内容或版权问题，请在30日内联系删除。
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